Публікації, в яких представлені результати проекту |
085 Фосфонові кислоти каліксаренів: синтез та біологічна активність. |
Автори: | В.І. Кальченко, С.О. Черенок, С.О. Костерін, Е.В. Луговський, С.В. Комісаренко, А.І. Вовк, В.Ю. Танчук, Л.А. Кононец, В.П. Кухар | |
Реферат: | | |
Ключові слова: | Каліксарени, фосфонові кислоти, глутатіон S-трансфераза, АТРази, полімеризація фібрину, супрамолекулярні комплекси. | |
Видання: | Phosphorus, Sulfur, and Silicon and the Related Elements, Special Issue: 19th International Conference on Phosphorus Chemistry (ICPC-2012) Rotterdam | | | 2013,
232-237,англійська |
085 Метиленбісфосфонові кислоти каліксаренів як перспективні ефектори біохімічних процесів. |
Автори: | С.В. Комісаренко, С.О. Костерін, Е.В. Луговський, В.І. Кальченко | |
Реферат: | | |
Ключові слова: | | |
Видання: | In: BIOCHEMISTRY AND BIOTECHNOLOGY FOR MODERN MEDICINE. Edited by Prof. Serhiy Komisarenko. К.: Publishing House Moskalenko O.M. 2013, 704 p. | | | 2013,
293-327,англійська |
085 Модулятори трансмембранного кальцієвого обміну в мітохондріях міометрія змінюють їхній гідродинамічний діаметр. |
Автори: | Н. В. Кандаурова, О. Ю. Чуніхін, Л. Г. Бабіч,
С. Г. Шликов, С. О. Костерін
| |
Реферат: | Досліджено вплив модуляторів обміну іонів Са в мітохондріях – олігоміцину, Mg2+ та рутенієвого червоного (RuR) – на розмір та гранулярність цих субклітинних структур, одержаних із гладенького м’яза матки. Методом фотонної кореляційної спектроскопії показано, що середній гідродинамічний діаметр ізольованих мітохондрій становить 655 ± 14 нм (n = 5; контроль). Внесення олігоміцину (1 мкг/мл) – інгібітора F0-компонента АТР -синтази, вірогідно індукує збільшення середнього гідродинамічного діаметра мітохондрій до 913 ± 75 нм (n = 5), що на 39% більше від контролю. У присутності в середовищі інкубації як RuR (10 мкМ), який є блокатором Са2+-уніпортеру, так і іонів Mg (7 мМ), середній гідродинамічний діаметр мітохондрій вірогідно збільшується відносно контролю до 788 ± 28 (n = 5) та 788 ± 38 (n = 5) нм відповідно, що на 17% більше від контрольного значення. Методом проточної цитометрії встановлено, що олігоміцин (1 мг/мл) спричинює збільшення бокового світлорозсіювання у суспензії ізольованих мітохондрій. Додавання RuR (10 мкМ) та Mg2+ (7 мМ) практично не призводить до суттєвих змін параметра бокового світлорозсіювання. Отже, гранулярність мітохондрій суттєво збільшується під впливом олігоміцину, але залишається майже незмінною за дії Mg2+ та RuR. | |
Ключові слова: | міометрій, ізольовані мітохондрії, фотонна кореляційна спектроскопія, проточна цитометрія
| |
Видання: | Український біохімічний журнал, Київ, Україна | | | 2010,
52-57,українська |
085 Порівняльне дослідження методами спектрофлуориметрії та протокової цитометрії поляризації плазматичної і внутрішньої мітохондріальної мембран гладеньком’язових клітин із використанням потенціалчутливого зонду ДіОС6(3) |
Автори: | Г.В. Данилович, Ю.В. Данилович, В.Ф. Горчев | |
Реферат: | Продемонстрована можливість застосування методів протокової цитометрії та спектрофлуориметрії для дослідження рівня поляризації як внутрішньої мітохондріальної, так і плазматичної мембран у суспензії міоцитів матки за допомогою потенціалчутливого зонда 3,3′-дигексилоксакарбоціаніну [DiOC6(3)]. Це дало підстави в подальшому використовувати його з метою вивчення впливу фізіологічно активних сполук на трансмембранні потенціали компартментів інтактних клітин | |
Ключові слова: | трансмембранний потенціал, потенціалчутливі зонди, протокова цитометрія, міоцити | |
Видання: | Український біохімічний журнал, Київ, Україна | | | 2011,
99-105,українська |
085 Трансмембранный обмен Са2+ в деполяризованных митохондриях миометрия крыс |
Автори: | Л.Г. Бабич, С.Г. Шлыков, Н.В. Кандаурова, С.А. Костерин | |
Реферат: | Поляризация внутренней мембраны является ключевым фактором в обеспечении аккумуляции физиологически значимых катионов, в частности Са2+, в матриксе митохондрий. Так, надежно показано, что вход ионов Са в митохондрии обеспечивается главным образом Са2+-унипортером, активность которого зависит от мембранного потенциала. Тем не менее есть отдельные сообщения о том, что и деполяризованные митохондрии способны аккумулировать Са2+. Цель данной работы – исследовать трансмембранный обмен ионов Са в митохондриях миометрия в условиях диссипации мембранного потенциала. Ранее нами было показано, что внесение Са2+ в инкубационную среду, не содержащую К+-фосфат, АТР и Mg2+, приводило к деполяризации митохондриальной мембраны. Однако при этом регистрируется дозо-зависимое повышение уровня ионизированного Са в матриксе митохондрий при помещении последних в Са2+-содержащую среду. Введение в инкубационную среду 10 мкМ рутениевого красного или 3-7 мМ Mg2+, классических ингибиторов Са2+-унипортера, сопровождалось ростом уровня ионизированного Са в деполяризованных митохондриях. Предварительная инкубация митохондрий с 5 мкМ циклоспорин А, ингибитором митохондриальной поры, не снижала уровень Са2+ в матриксе. Высказывается предположение, что в условиях блокады потенциал-зависимых механизмов входа Са в митохондрии, увеличение его уровня в матриксе, возможно, обеспечивается функционированием Са2+\Н+ обменника. Рост уровня ионизированного Са в митохондриях, по сравнению с контролем, в ответ на введение рутениевого красного или Mg2+, вероятно, обусловлен ингибированием Са2+-унипортера, который в условиях деполяризации функционирует как система, обеспечивающая выход катиона. | |
Ключові слова: | изолированные митохондрии миометрия; Са2+; мембранный потенциал; проточная цитометрия. | |
Видання: | Український біохімічний журнал, Київ, Україна | | | 2011,
56-62,російська |
085 Порівняльне дослідження впливу калікс[4]арену С-99 та його аналогів на Nа+,K+-ATP-азну активність у плазматичній мембрані міоцитів матки |
Автори: | Векліч Т.О., Шкрабак О.А., Черенок С.О., Кальченко В.І., Костерін С.О. | |
Реферат: | З метою визначення ролі структурної організації молекули калікс[4]арену С-99у проявленні інгібіторної дії на Nа+,К+-АТр-азу плазматичних мембран клітин міометрія досліджено дію структурно подібних до нього калікс[4]аренів С-296, С-297, С-424, С-425, С-426, С-427 на активність цього ензиму. Показано, що каліксарени С-296 та С-297 (мають дві додаткові пропокси-групи на ниж-ньому вінці макроциклу) є менш ефективними інгібіторами Na+,K+-АТР-ази порівняно з каліксареном С-99. Каліксарени С-425та С-427 (мають на верхньому вінці макроциклу відповідно три та чотири залишки фосфонових кислот) також інгібують активність Na+,K+-АТР-ази з нижчою ефективністю порівняно з каліксареном С-99. каліксарен С-424, в якого на верхньому вінці знаходяться лише два за-лишки карбонової кислоти, та каліксарен С-426, що містить на верхньому вінці кетометилфосфонові залишки замість гідроксиметилфосфонових залишків у каліксарені С-99, не впливають на активність Nа+,К+-АТР-ази. Зроблено відповідні висновки щодо ролі певних хімічних груп каліксарену С-99 у його взаємодії з Nа+,К+-АТР-азою. | |
Ключові слова: | Nа+,К+-АТР-аза, Mg2+-АТР-аза, плазматична мембрана, гладеньком’язові клітини, міометрій, кінетичні властивості АТР-ази, каліксарени, фосфонові кислоти | |
Видання: | Український біохімічний журнал, Київ, Україна | | | 2012,
49-57,українська |
085 Зміни поляризації плазматичної та внутрішньої мітохондріальної мембран клітин міометрія за дії каліксаренів – інгібіторів Na+,К+ - АТР-ази плазматичної мембрани |
Автори: | Данилович Г.В., Данилович Ю.В., Коломієць О.В., Костерін С.О., Родік Р.В., Черенок С.О., Кальченко В.І., Чуніхін О.Ю., Горчєв В.Ф., Карахім С.О. | |
Реферат: | Досліджено вплив супрамолекулярних макроциклічних сполук – калікс[4]аренів С-97, С-99, С-107 – уабаїноподібних високоафінних інгібіторів Na+,K+-атази – на рівень поляризації плазматичної та мітохондріальної мембран гладеньком’язових клітин матки щурів. Вивчено дію цих сполук на характеристичні розміри міоцитів. Із використанням лазерної конфокальної мікроскопії та специфічного щодо мітохондрій барвника MitoTracker Orange CM-H2TMRos доведено, що потенціалчутливий флуоресцентний зонд DiOC6(3) взаємодіє із мітохондріями в умовах штучного колапса потенціалу на плазматичній мембрані, спричиненого передінкубацією міоцитів з уабаїном (1 мМ). Експериментами за допомогою методу протокової цитофлуориметрії та DiOC6(3) з’ясовано, що каліксарени С-97, С-99 та С-107 у концентраціях 50–100 нМ, які відповідають уявним константам інгібування натрієвої помпи сарколеми гладенького м’яза, зумовлюють деполяризацію плазматичної мембрани (на рівні 30% відносно контрольних значень) в умовах штучного колапсу мітохондріального потенціалу в разі передінкубації міоцитів у присутності 5 мМ азиду натрію. В умовах штучної деполяризації сарколеми уабаїном каліксарени С-97, С-99 та С-107 у концентрації 100 нМ зумовлюють транзієнтне зростання мембранного потенціалу мітохондрій, яке сягає 40% від контрольного рівня і триває близько 5 хв. Одержані результати підтверджено даними лазерної конфокальної мікроскопії, згідно з якими С-99 та С-107 спричинюють істотне зростання флуоресценції навантажених DiOC6(3) міоцитів, передінкубованих з уабаїном. За допомогою методу фотонної кореляційної спектроскопії доведено, що С-99 та С-107 спричинюють зростання характеристичних розмірів міоцитів | |
Ключові слова: | калікс[4]арени, плазматична мембрана, мітохондрії, трансмембранний потенціал, гладенькі м’язи, матка, фотонна кореляційна спектроскопія | |
Видання: | Український біохімічний журнал, Київ, Україна | | | 2012,
37-48,українська |
085 Каликс[4]аренхалконамиды С-136 и С-137 гиперполяризуют мембрану митохондрий миометрия. |
Автори: | Л. Г. Бабич, С. Г. Шлыков, В. И. Бойко, М. А. Клячина, С. А. Костерин | |
Реферат: | Каликсарены – макроциклические соединения, взаимодействующие с биологически активными молекулами и ионами, вызывающие тем самым изменение хода ряда биохимических и биофизических процессов. Цель работы - исследование влияния каликс[4]аренов (К[4]A) С-136, С-137 и С-138 (приведены шифры) на поляризацию внутренней мембраны митохондрий миометрия крыс. Структура молекул синтезированных К[4]A была подтверждена методами 1Н-ЯМР и ИК-спектроскопии. С-136 и С-137 на нижнем ободе каликсареновой молекулы содержат две амидохалконовые группы, а С-138 – одну. С-136 и С-137 различаются наличием эфирных или гидроксильных групп, соответственно, на нижнем ободе каликсареновой платформы а также длиной алкильного спейсера между амидохалконовыми группами и макроциклом. Было показано, что в водной среде и в DMF С-136, С-137 и С-138 образуют мицеллы. Облучение мицелл аргоновым лазером на проточном цитометре приводит к появлению автофлуоресценции. В водной среде мицеллы К[4]A взаимодействуют с положительно заряженным потенциалчувствительным флуоресцентным зондом TMRM. Однако К[4]A, растворенные в DMF, не взаимодействуют с зондом TMRM. Уровень поляризации митохондриальных мембран тестировали с помощью флуоресцентных зондов MTG и TMRM на конфокальном микроскопе и зонда TMRM на проточном цитометре. Опыты проводили с использованием клеток миометрия в культуре и суспензии пермеабилизированных дигитонином миоцитов матки. С-136 и С-137 (10 мкМ) гиперполяризовали мембрану митохондрий. Максимальный эффект составлял 173% относительно контроля. В то же время С-138 не влиял на мембранный потенциал митохондрий. Обсуждается связь между структурной организацией молекул исследуемых каликс[4]аренов и их действием на поляризацию митохондриальной мембраны. | |
Ключові слова: | каликс[4]арены, мембранный потенциал митохондрий, миометрий | |
Видання: | Биоорганическая химия, Россия | | | 2013,
728-735,російська |
085 Калікс[4]арен С-107 як високоафінний супрамолекулярний інгібітор Nа+,К+-ATP-ази плазматичної мембрани |
Автори: | Бевза О.В., Векліч Т.О., Шкрабак О.А., Родік Р.В., Кальченко В.І., Костерін С.О. | |
Реферат: | В експериментах, виконаних на суспензії плазматичних мембран клітин міометрія, досліджували інгібувальну дію 5,17-ди(фосфоно-2-піридилметил)аміно-11,23-ди-трет-бутил-26,28-дигідрокси-25,27-дипропоксикалікс[4]арену (калікс[4]арен С-107, наведено шифр) на Na+,K+-ATPазну активність. Показано, що калікс[4]арен С-107 (10-8–10-4М) ефективніше, ніж уабаїн, пригнічує активність Na+,K+-АТРази, практично не впливаючи на активність базальної Mg2+-АТРази. Величи-на коефіцієнта інгібування і 0,5 дорівнює 33 ± 4 нМ, а значення коефіцієнта Хілла nH– 0,38 ± 0,06. Модельні сполуки: незаміщений за верхнім вінцем 25,27-дипропоксикаліксарен (каліксарен С-150, суто каліксаренова «платформа») (10-8 – 10-4М) та N-(4-гідроксифеніл)-2-піридил-амінофосфонова кислота (сполука М-3 – залишок, що модифікує верхній вінець каліксарену С-107 разом із фенольним фраг-ментом) (10-7 – 4⋅10-3М) практично не впливають на досліджувані ензиматичні системи.Проведено комп’ютерне моделювання взаємодії калікс[4]арену С-107 і його модельних спо-лук з лігандзв’язувальними ділянками Na+,K+-АТРази плазматичної мембрани. з’ясовано структурні основи міжмолекулярної взаємодії калікс[4]арену С-107 з лігандзв’язувальними ділянками ензиму. Обговорюється участь водневих, гідрофобних, електростатичних і π-π(стекінг)-взаємодій між калікс[4]ареном і амінокислотними залишками Na+,K+-АТРази, і розташовані поруч з активним центром АТРази. | |
Ключові слова: | Nа+,K+-АТРаза, плазматична мембрана, гладеньком’язові клітини, міометрій, калікс[4]арен С-107, комп’ютерне моделювання, докінг. | |
Видання: | Український біохімічний журнал, Київ, Україна | | | 2013,
5-19,українська |
085 Кінетичні закономірності дії калікс[4]арену С-90 на Са2+,Mg2+-АТРазну активність плазматичної мембрани та на концентрацію Са2+ в незбуджених клітинах міометрія |
Автори: | Векліч Т.О., Шкрабак О.А., Мазур Ю.Ю., Родік Р.В., Бойко В.І., Кальченко В.І., Костерін С.О. | |
Реферат: | Са2+,Mg2+-АТраза плазматичної мембрани є важливим елементом загального механізму кон- тролю базального тонусу міометрія, яка також частково забезпечує релаксацію м’язової напру- ги після скорочення м’язу. В експериментах, виконаних на суспензії плазматичних мембран клітин міометрія, обробленій 0,1%-им розчином дигітоніну, досліджували інгібуючу дію калікс[4]арену С-90 (5,11,17,23-тетра(трифтор)метил(фенілсульфоніліміно)-метиламіно-25,26,27,28-тетрапропокси- калікс[4]арен) на Са2+,Mg2+-АТразну активність ензиму. калікс[4]арен С-90 ефективно пригнічує Са2+,Mg2+-АТРазну активність ензиму (значення і0,5 для С-90 становить 20,2 ± 0,5 мкМ). інгібувальна дія калікс[4]арену С-90 на роботу Са2+-помпи передусім пов’язана саме з кооператив- ним впливом чотирьох просторово орієнтованих на калікс[4]ареновій платформі фенілсульфоніліміно- трифторометилацетамідних груп, а не з дією суто тетрафенольного макроциклу чи з дією окремих фармакофорних сульфоніламідинових груп. із урахуванням встановлених кінетичних закономірностей інгібувальної дії калікс[4]арену С-90 на Са2+,Mg2+-АТразну активність плазматичної мембрани роз- будовано стаціонарну кінетичну модель контролю рівня базальної концентрації Са2+ в незбудже- них міоцитах матки. Припускається, що одержані результати можуть бути перспективними для створення на основі калікс[4]арену С-90, фармакологічного препарату нового («супрамолекулярного») покоління – стимулятора базального тонусу матки. | |
Ключові слова: | Са2+,Mg2+-АТРаза, плазматична мембрана, гладеньком’язові клітини, міометрій, ензиматичний гідроліз АТР, кінетичні властивості АТРази, калікс[4]арени | |
Видання: | Український біохімічний журнал, Київ, Україна | | | 2013,
20-29,українська |
085 Каликс[4]арен С-90 селективно ингибирует Са2+,Mg2+-АТРазу плазматической мембраны клеток миометрия |
Автори: | Веклич Т.А., Шкрабак А.А., Слинченко Н.Н., Мазур Ю.Ю., Родик Р.В., Бойко В.И., Кальченко В.И., Костерин С.А. | |
Реферат: | С использованием фракции плазматических мембран клеток миометрия и препарата очищенной Са2+,Mg2+АТРазы, солюбилизированной из данной субклеточной структуры, продемонстрировано, что супрамолекулярное соединение – каликс[4]арен С-90 5,11,17,23-тетра(трифтор)метил(фенилсульфонилимино)метиламино-25,26,27,28-тетрапропоксикаликс[4]арен) – эффективно ингибирует АТР-гидролазную активность: величина коэффициента ингибирования І0,5 составляет 20,2 ± 0,5 и 58,5 ± 6,4 мкМ соответственно. Ингибирующее действие каликс[4]арена С-90 селективно относительно других АТРаз, локализованных в плазматической мембране: он не влияет на активности Na+,K+-АТРазы и «базальной» Mg2+АТРазы. Ингибирующий эффект каликс[4]арена С-90 на активность Са2+,Mg2+АТРазы связан с кооперативным действием четырех трифторметилфенилсульфонилиминовых (сульфониламидиновых) групп, однонаправленно ориентированных на верхнем ободе каликс[4]аренового макроцикла (каликс[4]ареновой «чаши»). Полученные экспериментальные данные могут иметь значение для исследования с использованием каликс[4]арена С-90 молекулярных и мембранных механизмов регуляции концентрации Са2+ в гладкомышечных клетках, изучения роли Са2+насоса плазматической мембраны в контроле электро и фармакомеханического сопряжения в миоцитах. | |
Ключові слова: | Са2+,Mg2+-АТРаза, кальциевый насос плазматической мембраны, гладкомышечные клетки, миометрий, каликс[4]арены, сульфониламидины. | |
Видання: | Биохимия, Россия | | | 2014,
417-424,російська |
085 Похідні імідазо [1,2-а]азепінію як модифікатори скоротливої активності міометрія |
Автори: | Мохорт М.А., Геращенко І.В., Шкрабак О.А., Мазур Ю.Ю., Векліч Т.О. | |
Реферат: | Цель работы – провести сравнительное исследование влияния некоторых производных имидазо[1,2-а]азепиния на сократительную активность матки и активность АТФаз плазматических мембран клеток миометрия. По результатам исследования токолитической активности среди про- изводных имидазо[1,2-а]азепиния была установлена зависимость между увеличением временных параметров сокращения и тонусом, а также наличием в исследованных структурах оксиметильных и оксиэтильных радикалов. Было установлено, что значительное увеличение временних параме- тров фазных сокращений миометрия зависит от наличия в структуре производных имидазо[1,2-а] азепиния атомов кислорода и азота, которые способны образовывать водородные связи. Исследо- вание действия производных имидазо[1,2-а]азепиния на активность АТФаз плазматической мем- браны миометрия продемонстрировало, что соединения ИФТ-176, ИФТ-208 активируют Са2+,Mg2+- АТРазу и ингибируют Na+,K+-АТРазу. Поэтому ингибирование сокращений мышечных полосок рогов матки, вызваных окситоцином, можно связать с активацией Са2+,Mg2+-АТРазы, что, в свою очередь, блокирует один из этапов биохимического механизма влияния окситоцина на внутриклеточный кальциевый гомеостаз в миометрии. В структуре многих лекарственных препаратов, которые используются как токолитики на сегодняшний день, присутствует оксиметильный и оксиэтильный радикалы. Мы считаем целесообразным использование этих радикалов в дизайне новых структур при создании новых эффективных и безопасных лекарственных средств, способных модулировать сократительную функцию матки при определенных патологиях. | |
Ключові слова: | похідні імідазо[1,2-а] азепінію, Са2+,Mg2+-АТРаза, Nа+, К+-АТРаза, Mg2+-АТРаза, Са2+-АТРаза, плазматична мембрана, гладеньком’язові клітини, міометрій, окситоцин | |
Видання: | Фармакологія та лікарська токсикологія, Київ, Україна | | | 2014,
65-72,українська |
085 Кінетика інгібіторної дії калікс[4]арену С-90 на активність транспортної Ca2+,Mg2+-АТРази плазматичної мембрани гладеньком`язових клітин |
Автори: | Векліч Т.О., Шкрабак О.А., Мазур Ю.Ю., Родік Р.В., Кальченко В.І., Костерін С.О. | |
Реферат: | В експериментах, виконаних на суспензії плазматичних мембран клітин міометрія, яку було оброблено 0,1%-им розчином дигітоніну, досліджували кінетичні закономірності інгібуючої дії калікс[4]арену С-90 (5,11,17,23-тетра(трифтор)метил(фенілсульфоніліміно)метиламіно-25,26,27,28-тетрапропокси-калікс[4]арен) на Са2+,Mg2+-АТРазну активність. Перевіряли спорідненість зазначеного ензиму до АТР, іонів Mg та Са в залежності від концентрації каліксарену С-90, а також його вплив на кооперативний ефект і на максимальну швидкість гідролізу АТР. Встановлено, що на спорідненість Са2+,Mg2+-АТРази до АТР каліксарен С-90 практично не впливає, що свідчить про відсутність конкуренції між центрами зв’язування АТР та С-90. Також відзначено відсутність впливу на спорідненість та кооперативний ефект іонів Са у разі застосування каліксарену С-90 в концентрації до 50 мкМ. Під впливом калікс[4]арену С-90 відмічено незначне зростання коефіцієнта активації Са2+,Mg2+-АТРази хлоридом магнію. У всіх трьох випадках спостерігається істотне зменшення максимальної швидкості гідролізу АТР, що в поєднанні з відсутнім впливом на константу спорідненості свідчить про неконкурентний механізм інгібування каліксареном С-90 Са2+,Mg2+-АТРазної активності. | |
Ключові слова: | Са2+,Mg2+-АТРаза, плазматична мембрана, гладеньком’язові клітини, міометрій, ензиматичний гідроліз АТР, кінетичні властивості АТРази, калікс[4]арени | |
Видання: | Український біохімічний журнал, Київ, Україна | | | 2014,
37-46,українська |
085 Активність Ca2+,Mg2+-АТРази плазматичної мембрани гладеньком`язових клітин селективно пригнічується калікс[4]ареном С-90 |
Автори: | Векліч Т., Шкрабак О., Мазур Ю | |
Реферат: | В експериментах, виконаних на суспензії плазматичних мембран клітин міометрія, обробленій 0,1 % розчином дигітоніну, досліджували дію калікс[4]арену С-90 (5,11,17,23-тетра(трифтор)метил(фенілсульфониліміно)-метиламіно-25,26,27,28-тетрапропоксі калікс[4]арен) на Са2+,Mg2+-АТРазну активність. Калікс[4]арен С-90 ефективно інгібує активність Са2+,Mg2+-АТРази (значення І0,5 для С-90 становить 20,2±0,5 мкМ). За результатами конфокальної мікроскопії С-90 (20 мкМ) транзієнтно підвищує концентрацію внутрішньоклітинного Са2+. Припускається, що одержані результати можуть бути перспективними для створення, на основі калікс[4]арену С-90, нового фармакологічного препарату – стимулятора механічної напруги міометрія. | |
Ключові слова: | Са2+,Mg2+-АТРаза, плазматична мембрана, міометрій, калікс[4]арени | |
Видання: | Вісник Львівського університету, Україна | | | 2014,
337-347,українська |
085 Модуляція мембранного потенціалу мітохондрій |
Автори: | С. Г. Шликов, Л. Г. Бабіч, М. Є. Євтушенко, С. О. Карахім, С. О. Костерін | |
Реферат: | Вплив антагоністів кальмодуліну – кальмідазоліуму та трифлуоперазину – на мембранний потенціал мітохондрій досліджували із використанням методів проточної цитометрії, конфокальної мікроскопії та залученням потенціалчутливих флуоресцентних зондів MTG та ТМRM. Вивчення впливу різних концентрацій антагоністів кальмодуліну на мембранний потенціал мітохондрій виконували на проточному цитометрі з використанням фракції ізольованих мітохондрій міометрія невагітних щурів. Встановлено, що кальмідазоліум у концентрації від 1 до 10 мкМ дозозалежно
знижує мембранний потенціал мітохондрій. У той же час, трифлуоперазин у концентрації від 10 до 100 мкМ діє різним чином: 10 мкМ – збільшує поляризацію, тоді як 100 мкМ спричинює майже повну деполяризацію мітохондріальних мембран. Методом конфокальної мікроскопії на клітинах міометрія продемонстровано, що внесення в середовище інкубації MTG приводить до появи флуоресценції в
«зеленому» діапазоні випромінювання. Додавання іншого зонда – ТМRM – зумовлює флуоресценцію в «червоному» діапазоні випромінювання. Деполяризація мітохондрій протонофором СССР та 10 мМ NaN3 супроводжується зниженням інтенсивності «червоної» флуоресценції, при цьому «зелена» флуоресценція зберігається. Внесення в середовище інкубації 10 мкМ кальмідазоліуму або 100 мкМ
трифлуоперазину супроводжується після 10–15 хв інкубації практично повним гасінням флуоресцентного сигналу зонда TMRM. Таким чином, із використанням потенціалчутливих флуоресцентних зондів TMRM та MTG продемонстровано, що антагоністи кальмодуліну модулюють мембранний потенціал мітохондрій клітин міометрія.
| |
Ключові слова: | проточна цитометрія, конфокальна мікроскопія, фракція мітохондрій, клітини міометрія, мембранний потенціал мітохондрій, кальмідазоліум, трифлуоперазин
| |
Видання: | Український біохімічний журнал, Київ, Україна | | | 2014,
29-41,українська |
085 Са2+/Н+-обмін у мітохондріях міометрія |
Автори: | Коломієць О.В., Данилович Ю.В., Данилович Г.В., Костерін С.О. | |
Реферат: | З використанням флуоресцентного зонда Fluo-4 АМ ідентифіковано Na+-незалежний Са2+/Н+- обмін в ізольованих мітохондріях міометрія щурів та вивчено його окремі властивості. Штучне створення спрямованого в матрикс мітохондрій градієнта протонів спричинює антипортне вивільнення Са2+, попередньо акумульованого в енергозалежному процесі (у присутності Mg-АТР та сукцинату). Функціонування Са2+/Н+-обміну залежить від величини градієнта протонів та характеризується зворотністю, а саме в умовах залуження позамітохондріального середовища реєструється додаткова акумуляція Са2+ органелами. Градієнти моновалентних катіонів (Na+, К+, Li+) не зумовлюють вивільнення Са2+ з мітохондрій. Швидкість Са2+/Н+-обміну зростає в умовах збільшення ∆рН на мембрані мітохондрій, а кінетика ∆рН-індукованого вивільнення Са2+ з матриксу відповідає закономірностям реакції першого порядку. Дослідження окремих властивостей Са2+/Н+-обміну в мітохондріях міометрія показало, що зазначений транспортний процес має електрогенну природу, можливо здійснюється в стехіометрії 1 : 1 (коефіцієнт Хілла щодо Н+ наближається до 1) і спроможний регулювати внутрішньомітохондріальну концентрацію Са2+ за фізіологічних умов (активації за рН ≈ 6,9). Отже, у внутрішній мембрані мітохондрій міометрія наявна система вторинно-активного транспортування Са2+ з матриксу цих органел у міоплазму, причому основою цього процесу, можливо, є функціонування Са2+/Н+-обмінника | |
Ключові слова: | мітохондрії, Са2+/Н+-обмін, гладенькі м’язи, міометрій, Letm 1 | |
Видання: | Український біохімічний журнал, Київ, Україна | | | 2014,
41-48,українська |
085 Регуляція функціонування мітохондріального АТР-чутливого К-каналу міометрія активними формами кисню |
Автори: | Вадзюк О.Б., Мазур Ю.Ю., Костерін С.О. | |
Реферат: | У попередніх роботах, виконаних на ізольованих мітохондріях матки щурів, нами було показано функціонування АТР-чутливого К+-каналу (мітоКАТР). Регуляція данного каналу у клітинах міометрію не є достатньо вивченою. Тому дослідження активації мітоКАТР за умов окисного стресу вважається актуальним.
Відомо, що активні форми кисню (АФК), що генеруються при окисному стресі, можуть не тільки індукувати апоптоз, але й також медіювати захист клітини від стресу. Активація мітоКАТР АФК, що забезпечує виживання клітини в умовах окисного стресу, була показана на клітинах мозку та серця. Але відомостей стосовно регуляції АФК даної структури у клітинах матки немає. Тому метою даної роботи було дослідження впливу АФК на активацію мітоКАТР у клітинах матки щурів.
Окисний стрес у ізольованих міоцитах щурів індукували ротеноном (50 мкМ). Було продемонстровано масоване утворення АФК та гіперполяризацію мітохондріальної мембрани в присутності ротенону. Активація мітоКАТР селективним активатором діазоксидом призводила до деполяризації мітохондріальної мембрани, яка усувалась селективним блокатором цієї структури глібенкламідом (20 мкМ). Діазоксид виявляв дозозалежний ефект на потенціал мітохондрій у діапазоні концентрацій від 500 нМ до 75 мкМ. Максимальний ефект спостерігався при 25 мкМ діазоксиду. Уявна константа спорідненості діазоксиду до мітоКАТР (‹К1/2›р ) в присутності ротенону становила (1.24 ± 0.21) *10-6 М. Діазоксид також деполяризував мітохондріальну мембрану в умовах нормоксії, але ‹К1/2› у цьому випадку була більшою і становила (5.01 ± 1.47) *10-6 М.
Скавенджер активних форм кисню (АФК) N-ацетилцистеїн (NAC)(0.5 – 1 мМ) успішно попереджав деполяризацію мітохондріальної мембрани діазоксидом за умов окисного стресу, викликаного ротеноном. Наші дані свідчать, що зв’язування АФК N-ацетилцистеїном попереджає активацію мітоКАТР за умов окисного стресу. Зроблено висновок, що АФК регулюють активність мітоКАТР.
| |
Ключові слова: | мітохондрії, АТР-чутливий К+-канал, діазоксид, активні форми кисню | |
Видання: | Український Біохімічний Журнал, 2011, Київ, Україна | | | 2011,
48-57,українська |
085 Структурно-функціональні основи міжмолекулярної взаємодії калікс[4]арену С-97 із субфрагментом-1 міозину міометрія |
Автори: | Лабинцева Р.Д., Бевза А.А., Бевза О.В., Черенок С.О., Кальченко В.І., Костерін С.О. | |
Реферат: | Калікс[4]арен С-97 (зазначено шифр) - це макроциклічна сполука, що має внутрішньомолекулярну високовпорядковану ліпофільну порожнину, утворену чотирма ароматичними макроциклами, один з яких по верхньому вінцю функціоналізований метиленбісфосфоновою групою. Показано, що ця сполука у 100 мкМ концентрації ефективно інгібує АТР-азну активність субфрагмента-1 міозину міометрія свині; константа інгібування І0,5 становить 83 ± 7 мкМ. Водночас, зазначений калікс[4]арен спричинює вірогідне, стосовно контролю, збільшення ефективного гідродинамічного діаметра субфрагмента-1 міозину, що може свідчити про міжмолекулярне комплексоутворення між каліксареном та голівкою міозину. З використанням методів комп’ютерного моделювання (докінг, молекулярна динаміка із залученням грід-технологій) з’ясовані структурні основи міжмолекулярної взаємодії калікс[4]арену С-97 із субфрагментом-1 міозину міометрія: показана динаміка вбудовування каліксарену С-97 у ліганд-зв`язувальний центр голівки міозину, що відбувається за участі головним чином гідрофобних та електростатичних взаємодії між каліксареном С-97 та амінокислотними залишками субфрагмента-1 міозину, окремі з яких розташовані поряд з активним центром АТР-ази. | |
Ключові слова: | АТРаза, субфрагмент-1 міозину, каліксарен С-97, гладенькі м’язи, матка.
| |
Видання: | Український біохімічний журнал. Київ, Україна | | | 2012,
34 – 44.,українська |
Конференції, семінари, читання, на яких представлені результати проекту |
085 085 085 085 085 085 085 085 085 085 085 085 085 085 085 085 085 085 085 085 085 085
|
085 Напрям 5. Нанобіотехнології Мета:одержання нових знань щодо біофізикохімічних властивостей і молекулярних механізмів дії каліксаренів на ензиматичні та катіон-транспортуючі білки біологічних мембран, розробка теорії мембранотропного впливу зазначених наносполук Очікувані результати:Випуск нового виду продукції: методів, теорій Етап 1:Вивчення взаємодії між калікс[4]аренами та мембранами клітин міометрія Етап 2:Вивчення взаємодії калікс[4]аренів та їхніх фрагментів та ізомерів з мембранозв’язаними та солюбілізованими іон-транспортними білками-мішенями Етап 3:Дослідити залежності біологічної активності каліксаренів (зокрема, калікс[4]аренів) як наномодуляторів АТР-залежних катіон-транспортуючих систем, катіонних обмінників та уніпортерів, від структурної організації та фізико-хімічних властивостей каліксаренової молекули Етап 4:Із використанням методів спектрофлуорометрії, мас-спектрометрії, grid-технологій, докінг-аналізу та молекулярного моделювання здійснити розбудову молекулярних моделей в системах “іон-транспортуючий білок/калікс[4]арен/іони металів-активаторів/АТР” Етап 5:Провести комплекс порівняльних досліджень in vitro та in vivo, спрямованих на з’ясування закономірностей дії відселекціонованих калікс[4]аренів на мембранозв’язані АТР-залежні іон-транспортуючі білки різних тканин (м’язи – гладенькі, скелетні, міокард), мозок, печінка
|