Публікації, в яких представлені результати проекту |
084 Отримання та характеристика рекомбінантних одноланцюгових варіабельних фрагментів антитіл (scFv) Проти гепарин-зв’язувального EGF-подібного фактору росту людини |
Автори: | О.С. Олійник, А.А. Кабернюк, Д.В. Колибо, С.В. Комісаренко | |
Реферат: | Гепарин-зв’язувальний EGF-подібний фактор росту – HB-EGF (акронім від англ. heparin-binding epidermal growth factor (EGF)-like growth factor), що належить до EGF-родини ростових факторів, відіграє важливу роль у багатьох фізіологічних та патологічних процесах. Антитіла є важливим інструментом для дослідження функцій HB-EGF за нормальних та патологічних умов. Метою цієї роботи було виділити та вивчити деякі властивості рекомбінантних одноланцюгових варіабельних фрагментів антитіл (scFv-антитіл), специфічних до HB-EGF. Для цього було сконструйовано фагову імунну бібліотеку scFv-антитіл миші, імунізованої рекомбінантним людським розчинним HB-EGF. Після скринінгу бібліотеки проти HB-EGF було виділено 2 групи клонів антитіл, що характеризувалися різними наборами рестриктних фрагментів. По одному клону із кожної групи (scFv 5А та 7Е) було охарактеризовано. Було показано, що scFv з цих клонів здатні зв’язуватися і з людським, і з мишачим HB-EGF. Обидва клони розпізнавали цільовий антиген у вестерн-блоті, але лише за нередукуючих умов. Методом конфокальної мікроскопії було також продемонстроване специфічне зв’язування scFv 5А та 7Е з клітинами лінії Vero, які характеризуються високим рівнем HB-EGF на поверхні клітини.
Таким чином, в даній роботі було одержано scFv-антитіла проти розчинного HB-EGF, які придатні для різних видів імунохімічного аналізу, зокрема для застосування в сорбційному імуноферментному аналізі, імуноблотингу та імуноцитохімії. Можливо, що такі scFv-антитіла можуть бути також використані в дослідженнях HB-EGF та для розробки нових діагностичних і терапевтичних засобів. | |
Ключові слова: | Гепарин-зв’язувальний EGF-подібний фактор росту, scFv-антитіла, фаговий дисплей | |
Видання: | Biotechnologia Acta | | | 2012,
Т.5, №6. – С. 47-56.,українська |
084 Одержання та характеристика флуоресцентних похідних рекомбінантного аналога секреторної форми HB-EGF людини |
Автори: | Н. В. Короткевич, А. Ю. Лабинцев, Д. В. Колибо, С. В. Комісаренко | |
Реферат: | Гепаринзв’язувальний фактор росту, подібний до епідермального ростового фактора – HB-EGF (Heparin-Binding Epidermal growth factor-like Growth Factor), належить до родини епідермальних ростових факторів і синтезується у вигляді мембранно-заякореного попередника pro-HB-EGF. Зв’язування секреторної форми фактора sHB-EGF (soluble HB-EGF) з рецепторами EGFR і HER-4 приводить до утворення відповідних лігандрецепторних комплексів та активації сигнальних шляхів, які відіграють важливу роль у регулюванні проліферації, диференціації та міграції клітин. Метою роботи було одержання рекомбінантних флуоресцентних похідних на основі повнорозмірної форми sHB-EGF людини (mCherry-sHB-EGF) та вкороченої форми sHB-EGFΔ84-106 (mCherry-sHB-EGFΔ84-106), яка б не містила гепаринзв’язувальної ділянки. | |
Ключові слова: | гепаринзв’язувальний EGF-подібний фактор росту (HB-EGF), рецептор епідермального фактора росту | |
Видання: | Biotechnologia Acta | | | 2014,
Т. 7, № 2, С. 46-53,українська |
084 Рекомбінантні антитіла для фундаментальних і прикладних досліджень |
Автори: | Олійник О.С. | |
Реферат: | Технологія рекомбінантних антитіл є потужним підходом для отримання нових діагностичних та терапевтичних реагентів. Рекомбінантні антитіла можуть застосовуватись для створення систем доставки лікарських засобів, імунотоксинів, як інтрабоді. Вони також можуть бути об’єднані на рівні ДНК із різноманітними маркерними молекулами, такими як флуоресцентні білки чи ферменти, для одностадійної імунодетекції антигенів. В цій роботі розглянуто основні властивості рекомбінантних антитіл та сучасні розробки щодо їх практичного використання. | |
Ключові слова: | рекомбінантні антитіла, scFv, імуноліпосоми,імунотоксини, інтрабоді | |
Видання: | Вісник Національної Академії Наук України | | | 2014,
№9. – С 77-88.,українська |
084 Иммунолипосомы для направленной доставки биологически активных соединений в клетки опухолевых тканей |
Автори: | Е.С. Олейник, А.Ю. Лабынцев, К.Ю. Манойлов, Д.В. Колибо, С.В. Комисаренко | |
Реферат: | Для клеток многих типов опухолей наблюдается повышение уровня экспрессии Гепарин-связывающего EGF-подобного фактора роста (HB-EGF). Поэтому, данная молекула может рассматриваться как важная мишень для опосредованной антителами доставки лекарственных препаратов в опухолевые клетки. В этом исследовании мы получили одноцепочечные вариабельные фрагменты антител (scFv) к HB-EGF и использовали их для создания иммунолипосом.
Специфическое связывание и интернализация полученных иммунолипосом были проверены на клетках линии Vero, экспрессирующих HB-EGF. Методами проточной цитофлуориметрии и флуоресцентной микроскопии было показано, что HB-EGF-специфичные иммунолипосомы, в отличие от контрольных липосом, эффективно связывались и поглощались клетками линии Vero. Полученные результаты демонстрируют, что HB-EGF-специфичные иммунолипосомы способны обеспечить эффективную адресную доставку противоопухолевых препаратов в HB-EGF-экспрессирующие клетки | |
Ключові слова: | иммунолипосома, направленная доставка, scFv-антитела, HB-EGF | |
Видання: | “Наноразмерные системы и наноматериалы: исследования в Украине” (п.ред. А.Г Наумовца): НАН Украины. – К.: Академпериодика | | | 2014,
510-514,російська |
Конференції, семінари, читання, на яких представлені результати проекту |
|
084 Напрям 5. Нанобіотехнології Мета:Розробити метод направленої доставки біологічно активних речовин всередину пухлинних клітин з використанням імуноліпосом, що в якості молекули-ліганда несуть scFv-антитіла проти потенційного онкомаркера – HB-EGF Очікувані результати:Випуск нового виду продукції: методів, теорій Етап 1:Отримання імунної до HB-EGF бібліотеки імуноглобулінових генів миші Етап 2:Відбір scFv-антитіл проти HB-EGF. Оптимізація синтезу просторово стабілізованих ліпосом Етап 3:Оптимізація методики кон’югації scFv-антитіл проти HB-EGF із ліпосомами. Вивчення внутрішньоклітинного трафіку отриманих імуноліпосом Етап 4:Вивчення фармакокінетики та тканинної локалізації імуноліпосом Етап 5:Вивчення протипухлинної активності отриманих імуноліпосом, нагружених токсичним агентом
|